Modele de tampon encreur

Remarque technique il peut être nécessaire d`ajouter des inhibiteurs de la protéase ou de la phosphatase au tampon d`impression protéique pour augmenter la stabilité de certaines protéines ou extraits de protéines. La stabilité des protéines peut également être améliorée si la fabrication de microarray est effectuée à 4C. Le SpotBot Personal microarrayer peut être déplacé dans une chambre froide facilement, et exploité à 4C. Un «plateau froid» spécial est également disponible pour le SpotBot® 2 si une température d`impression 4C est nécessaire dans un environnement de laboratoire ambiant. Veuillez contacter arrayit@arrayit.com pour obtenir des informations techniques. Le tampon d`impression de peptide d`ArrayIt (PEP) est un système avancé de deux tampons contenant un mélange breveté de solvants organiques et de matériaux ioniques et polymériques pour l`impression de microarray de peptide de haute qualité. Cette formulation avancée améliore la fabrication de microbaies peptidiques sur les glissières de substrat microarray SuperEpoxy 2 et SuperEpoxy 3 et d`autres chimies de surface. Fourni en tant que système à deux tampons. Re-suspendre les peptides à 1 mg/ml dans PEP1 buffer et ajouter un volume égal de PEP2 buffer, fourni sous forme de volumes de 2 50 ml de solutions filtrées 2X. Protocole court (étapes 1-10) 1. Prélever des échantillons de protéine 0,2-1,0 g/l. 2.

Transférer 4,0 l par puits de chaque échantillon de protéine dans des microplaques de 96 ou 384 puits. 3. Ajouter 4,0 l par puits de 2 x tampon d`impression de protéine ArrayIt (PPB). 4. Mélanger les échantillons en pipetant de haut en bas 10 fois. 5. Imprimez des échantillons de protéines sur SuperEpoxy, Superaldéhyde, SuperNitro ou SuperAmine. 6. Utilisez BlockIt pour bloquer et traiter les microarrays de protéines imprimées.

7. Réagir aux Microarrays traités avec des échantillons fluorescents. 8. Lavez les microarrays pour enlever le matériau fluorescent non réagi. 9. Scannez le microarray pour produire une image fluorescente. 10. Quantiez et modélisez les données fluorescentes. La figure 1. Dix échantillons d`anticorps monoclonaux et polyclonaux de QED Biosciences, Inc. (San Diego, CA) ont été suspendus à une concentration finale de 0,1-0,5 g/l dans un tampon d`impression de protéine ArrayIt, et imprimés cinq fois chacun sur des substrats SuperEpoxy ArrayIt à l`aide d`un SpotBot Microarrayer personnel ou NanoPrint exécutant SMP9 micro spotting pins.

Les microarrays imprimés ont été bloqués pendant 30 min avec 1X solution saline tamponnée au phosphate (PBS) contenant 1% d`albumine sérique bovine (BSA), puis lavés trois fois pendant 2 min chacun dans 1X PBS. Le microarray d`anticorps a été incubé pendant 60 min avec un échantillon fluorescent contenant 1X PBS, 0,5% BSA et 1:1000 dilutions de Cy3-goat anti-Rabbit et Cy5-Goat anticorps anti-souris. Le microarray a été lavé 3 fois pendant 5 min chacun avec 1X PBS et scanné avec un scanner de microarray ChipReader de Virtek Vision (Ontario, Canada) mis à 100 puissance laser, 1000 PMT, et gain 10 dans les canaux Cy3 et Cy5. Une image composite à deux couleurs a été analysée à l`aide du logiciel QuantArray de Perkin Elmer (Boston, MA). Toutes les incubations et lavages ont été effectués à température ambiante (22C). Les données révèlent l`efficacité de couplage des anticorps à la surface SuperEpoxy, et l`efficacité et la spécificité des réactions de liaison anticorps-anticorps. Équipement Recommandénanoprint 2 Microarrayers946 détection de la Micrologiquemicro-repérages de l`Alimentationpotbot® 4 micro-Époquesuperepoxy 3 microarray sous-Stratétiquevesupteur d`impression Protéinaireblockit de blocage CentrifugeMicroarray à haute vitesse hybridation cassette 3. Ajoutez 4,0 l par puits de 2 x tampon d`impression de protéine ArrayIt (PPB). Ceci donnera une concentration finale de 1X tampon d`impression de protéine et une concentration finale de protéine de 0.1-0.5 g/l.

certaines protéines ou extraits de protéines sont plus stables à 4C. Garder les échantillons de protéines fraîches peut améliorer la stabilité. La stabilité peut également être améliorée dans certains cas par les inhibiteurs de l`addition ou de la protéase et de la phosphatase ou par l`utilisation d`un microarrayer personnel SpotBot 2 équipé d`un plateau refroidi.